Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Р, пробирку закрывают, встряхивают и оставляют на 60 мин. Затем прибавляют 1 мл реактива железа (III) хлорида и сульфаминовой кислоты Р и оставляют на 15 мин.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят эталон, используя вместо 0,5 мл разведенной испытуемой вакцины 0,5 мл раствора формальдегида Р, разведенного до содержания формальдегида (СН2О) 5 мкг/мл.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученных растворов на спектрофотометре при длине волны 628 нм, используя в качестве компенсационного раствора контрольный раствор.
Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать оптическую плотность эталона.
Если испытуемая вакцина представляет собой эмульсию, водную фазу отделяют следующим способом. К вакцине прибавляют равный объем изопропилмиристата Р и перемешивают. К трем объемам полученной смеси прибавляют два объема 1 М раствора кислоты хлористоводородной, три объема хлороформа Р и четыре объема раствора 9 г/л натрия хлорида Р. Тщательно перемешивают и центрифугируют с ускорением 15000 g в течение 60 мин. Водный слой отбирают и измеряют его объем. Водный слой используют для испытания на формальдегид, как указано выше.
Вычисляют концентрацию формальдегида в эталоне с учетом разведения вакцины в процессе разделения слоев и готовят эталон с соответствующей концентрацией.
Если описанная процедура не позволяет достичь разделения слоев, прибавляют раствор 100 г/л полисорбата 20 Р в растворе 9 г/л натрия хлорида Р и повторяют процедуру, центрифугируя с ускорением 22500 g.
2.4.19. ЩЕЛОЧНЫЕ ПРИМЕСИ В ЖИРНЫХ МАСЛАХ
В пробирку помещают 10 мл свежеперегнанного ацетона Р и 0,3 мл воды Р, прибавляют 0,05 мл раствора 0,4 г/л бромфенолового синего Р в спирте Р; при необходимости раствор нейтрализуют 0,01 М раствором кислоты хлористоводородной или 0,01 М раствором натрия гидроксида, затем прибавляют 10 мл испытуемого масла, встряхивают и оставляют до разделения слоев.
Для изменения окраски верхнего слоя в желтую должно быть израсходовано не более 0,1 мл 0,01 М раствора кислоты хлористоводородной.
2.4.20. АНТИОКСИДАНТЫ В ЖИРНЫХ МАСЛАХ
Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии (2.2.27), используя пластинки, покрытые тонким слоем силикагеля G Р. Перед применением пластинки высушивают при температуре 130°С в течение 2 ч.
Испытуемый раствор (а). 20 г испытуемого образца, взятого из среднего слоя масла помещают в делительную воронку, прибавляют 50 мл петролейного эфира Р и энергично встряхивают с двумя порциями по 30 мл метанола (75 % об/об). После четкого разделения слоев нижние, метанольные, слои объединяют и выпаривают при пониженном давлении и возможно более низкой температуре в атмосфере азота. Остаток растворяют в 5 мл хлороформа, свободного от этанола Р. Хранят в плотно укупоренном сосуде.
Испытуемый раствор (b). Слой петролейного эфира (верхний слой), полученный при приготовлении испытуемого раствора (а), осторожно выпаривают до сухого остатка. Прибавляют 0,5 г пирогаллола Р, растворенного
в 100 мл этанола Р, затем 15 мл свежеприготовленного раствора 330 г/л натрия гидроксида Р и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Охлаждают, прибавляют 250 мл воды Р и извлекают неомыляемые вещества тремя порциями по 100 мл петролейного эфира Р. Объединенные извлечения петролейного эфира промывают водой Р до отсутствия щелочной реакции и выпаривают до сухого остатка. Остаток растворяют в 5 мл хлороформа, свободного от этанола Р. Хранят в хорошо укупоренном сосуде.
А. НЕПОЛИГИДРОКСИАНТИОКСИДАНТЫ
Пластинку помещают в хроматографическую камеру с хлороформом, свободным от этанола, Р. Когда фронт растворителя пройдет около 12 см от нижнего края пластинки, пластинку вынимают из камеры, высушивают в течение 20 мин на воздухе, затем в течение 20 мин в эксикаторе под вакуумом.
На линию старта хроматографической пластинки, подготовленной, как указано выше, в стартовую точку №1 (см. Рис. 2.4.20.-1) наносят
испытуемый раствор (а) в виде пятна диаметром не более 5 мм. Объем наносимого испытуемого раствора (а) зависит от его концентрации и составляет обычно от 2 мкл до 10 мкл. В стартовые точки №№2 и 3 (см. Рис. 2.4.20.-1) наносят по 2 мкл окрашенного раствора, содержащего по 0.1 г/л диметилового желтого Р, судана красного GР и индофенолового синего Р в бензоле Р. На пластинке отмечают длину пробега (10 см) в двух направлениях. В первый раз пластинку хроматографируют в камере с хлороформом, свободным от этанола Р. Пластинку высушивают на воздухе в течение 10 мин, затем поворачивают на 90° и хроматографируют в камере с бензолом Р. Пластинку высушивают на воздухе в течение 5 мин и опрыскивают раствором 200 г/л кислоты фосфорномолибденовой Р в этаноле Р до устойчивого окрашивания пластинки в желтый цвет. Через 2 мин начинают проявляться синие пятна. В течение первых 5-10 мин пластинку обрабатывают парами аммиака до тех пор, пока фон не станет чисто белым. На пластинке остаются синие, светло-фиолетовые или зеленоватые пятна.
Пер4йЄ Д-ір>м.ТГпиЄ
